正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。 他们合力与恶势力展开斗争……
演员：迈克尔·埃尔菲克 埃斯蒙德·奈特 咪咪莱 阿斯特丽兹·亨宁-延森 拉斯·冯·提尔 普雷本·勒尔多夫·雷 卡米拉·奥弗拜·鲁斯 莫根斯·卢克夫 Jerold Wells Ahmed El Shenawi János Herskó Stig Larsson Harry Harper Roman Moszkowicz Frederik Casby Duke Addabayo Jon Bang Carlsen Leif Magnusson Gotha Andersen
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演员：Veronica Valencia Melinna Bobadilla Vincent Calvarese Nestor Cuellas Philip Kan Gotanda James Hiser Geoff Hoyle David Louis Klein Donald Lacy Richard Montoya Alejandro Murguia Brian J. Patterson Dion Reiner-Guzman Alexandra Tejeda Rieloff Sean San Jose
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